کیت تشخیص PCR بروسلا ملی تنسیس/آبرتوس (۵۰ واکنش) – مبتنی بر PCR معمولی

معرفی کیت تشخیص PCR بروسلا ملی تنسیس/آبرتوس
این کیت یک سیستم تشخیص مولکولی مبتنی بر واکنش زنجیره‌ای پلیمراز معمولی (Conventional PCR) است که برای شناسایی و تمایز دو گونه‌ی مهم و بیماری‌زای بروسلا، یعنی Brucella melitensis و Brucella abortus، در نمونه‌های بالینی و دامی طراحی شده است. بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام با اهمیت اقتصادی و بهداشتی بالاست که تشخیص سریع و دقیق آن به دلیل علائم بالینی غیراختصاصی و عوارض جدی از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. این کیت برای ۵۰ واکنش (۵۰ تست) طراحی شده است.

اهمیت تشخیص بروسلا ملی تنسیس و آبرتوس
از میان گونه‌های مختلف بروسلا، B. melitensis به عنوان مهاجم‌ترین گونه شناخته شده و باعث شدیدترین موارد بروسلوز در انسان می‌شود. B. abortus نیز یکی از شایع‌ترین علل عفونت در دام و انسان است. روش‌های سرولوژیک سنتی اغلب قادر به تشخیص قطعی و تمایز گونه‌ها نیستند، در حالی که روش PCR با حساسیت و ویژگی بالا، تشخیص را در سطح مولکولی ممکن می‌سازد.

فناوری و مکانیسم عملکرد
این کیت بر اساس PCR معمولی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی گونه طراحی شده است. عملکرد کیت به شرح زیر است:

– استخراج DNA: DNA ژنومی از نمونه‌های بالینی (خون، سرم، شیر، بافت یا سواب) استخراج می‌شود.
– آماده‌سازی واکنش: DNA استخراج شده به مخلوط واکنش (Master Mix) حاوی بافر، آنزیم DNA پلیمراز، dNTPها و پرایمرهای اختصاصی اضافه می‌شود.
– تکثیر هدف: در دستگاه ترموسایکلر، قطعات خاصی از ژنوم باکتری با استفاده از پرایمرهای اختصاصی B. melitensis و B. abortus تکثیر می‌شوند. اندازه قطعات تکثیر شده متفاوت است که امکان تشخیص و تمایز گونه‌ها را فراهم می‌کند. به عنوان مثال، در روش‌های Multiplex PCR مانند Bruce-ladder، قطعات با اندازه‌های ۷۳۱ جفت‌باز برای B. melitensis و ۴۹۸ جفت‌باز برای B. abortus قابل تشخیص هستند. همچنین می‌توان از پرایمرهای اختصاصی ژن‌های مختلف مانند ژن کدکننده ۳۱ کیلودالتونی (bcsp31) برای شناسایی جنس بروسلا استفاده کرد.
– تشخیص: پس از اتمام PCR، محصولات تکثیر شده توسط الکتروفورز روی ژل آگارز جداسازی شده و با رنگ‌آمیزی قابل مشاهده هستند. وجود باند با اندازه مشخص در ژل، نشان‌دهنده حضور گونه مربوطه در نمونه است.
– کنترل داخلی: کیت شامل یک کنترل داخلی (Internal Control) برای تأیید فرآیند استخراج DNA و عدم وجود بازدارنده‌های PCR است تا از بروز نتایج منفی کاذب جلوگیری شود.

ویژگی‌های کلیدی محصول
– تعداد واکنش: ۵۰ واکنش (۵۰ تست).
– فناوری: Conventional PCR با پرایمرهای اختصاصی گونه.
– منطقه هدف: ژن‌های اختصاصی B. melitensis و B. abortus (مانند ژن‌های bcsp31، IS711، یا نواحی ITS).
– تشخیص: الکتروفورز روی ژل آگارز.
– نمونه: قابل استفاده بر روی خون، سرم، پلاسما، شیر، سواب، بافت و کشت باکتریایی.
– اجزای کیت: پرایمرهای اختصاصی (Forward و Reverse)، کنترل مثبت DNA، کنترل منفی (آب عاری از DNase/RNase)، و دستورالعمل کامل.
– دمای نگهداری: ۲۰- درجه سانتی‌گراد.

کاربردهای تحقیقاتی
– تشخیص سریع و دقیق بروسلوز در دام و انسان.
– تمایز گونه‌های B. melitensis و B. abortus در نمونه‌های بالینی.
– غربالگری دام‌ها و کنترل بیماری در گله‌های دامی.
– مطالعات اپیدمیولوژیک و بررسی شیوع بروسلوز.
– تشخیص عفونت در نمونه‌های سقط جنین دام.

نکات مهم و توصیه‌ها
– از تکرار انجماد و ذوب اجزای کیت خودداری کنید.
– تمام مراحل را در شرایط استریل و با استفاده از Tips فیلتردار انجام دهید.
– از کنترل‌های مثبت و منفی در هر بار اجرای آزمایش استفاده کنید.
– دمای اتصال پرایمرها و چرخه‌های PCR را طبق دستورالعمل کیت تنظیم کنید.
– نتایج را با استفاده از ژل الکتروفورز ۱.۵-۲ درصد آگارز و مشاهده باندهای با اندازه مناسب تفسیر کنید.

کلمات کلیدی مرتبط:
کیت تشخیص بروسلا، Brucella PCR Kit، Conventional PCR، تشخیص بروسلوز، Brucella melitensis، Brucella abortus، بروسلا ملی تنسیس، بروسلا آبرتوس، PCR دام، تشخیص سقط جنین دام، ۵۰ واکنش