Bacterial Competent Cell Preparation Kit (۵ واکنش)
1.200.000 تومان
معرفی کیت آمادهسازی سلولهای مستعد (Competent Cell Preparation Kit)
کیت آمادهسازی سلولهای مستعد باکتریایی یک محصول تخصصی برای تبدیل سلولهای باکتریایی (مانند E. coli) به سلولهای مستعد برای پذیرش پلاسمید یا DNA خارجی است. این کیت با استفاده از روش شیمیایی (کلرید کلسیم) یا روش الکتروپوریشن (با توجه به نوع کیت)، سلولها را در حالت Competent قرار میدهد که قادر به جذب DNA نوترکیب از محیط اطراف خود هستند. این محصول برای ۵ واکنش طراحی شده و برای کلونینگ ژن، ترانسفورماسیون، و تحقیقات مهندسی ژنتیک کاربرد دارد. سلولهای مستعد پس از آمادهسازی، برای ترانسفورماسیون با پلاسمیدها، محصولات PCR، یا کتابخانههای ژنی استفاده میشوند. این محصول برای ۵ واکنش (۵ میکروتیوب مجزا) طراحی شده و شامل تمامی معرفهای لازم برای آمادهسازی سلولهای مستعد و ترانسفورماسیون میباشد.
ویژگیهای کلیدی محصول:
– تعداد واکنش: ۵ واکنش مجزا (۵ میکروتیوب)
– نوع روش: شیمیایی (کلرید کلسیم) – با توجه به نوع محصول
– سویه مناسب: E. coli سویههای رایج مانند DH5α، TOP10، BL21 (با توجه به نیاز کاربر)
– کارایی ترانسفورماسیون: معمولاً ۱۰⁶-۱۰⁸ CFU/µg پلاسمید (بسته به نوع کیت و سویه)
– محتویات کیت: بافر TSS (یا CaCl2)، بافر LB، و برخی افزودنیهای اختیاری
– دمای نگهداری: ۲۰- درجه سانتیگراد (برای نگهداری طولانیمدت) یا ۴ درجه سانتیگراد (برای استفاده کوتاهمدت)
– پایداری: حداقل ۶ ماه در شرایط نگهداری مناسب
مراحل آمادهسازی سلولهای مستعد با روش شیمیایی:
۱. کشت سلولها: یک کلنی تازه از باکتری را در محیط کشت مایع (مثلاً LB) تلقیح کرده و تا OD600 حدود ۰.۴-۰.۶ کشت دهید
۲. سرد کردن: سلولها را بر روی یخ به مدت ۱۰-۱۵ دقیقه سرد کنید
۳. سانتریفیوژ: سلولها را با سرعت ۴۰۰۰-۵۰۰۰ دور در دقیقه به مدت ۵ دقیقه در دمای ۴ درجه سانتیگراد سانتریفیوژ کنید
۴. شستشو: پلت سلولی را در بافر CaCl2 سرد (محلول موجود در کیت) حل کرده و مجدداً سانتریفیوژ کنید
۵. سوسپانسیون نهایی: پلت را در بافر CaCl2 سرد حل کرده و به میکروتیوبهای مجزا تقسیم کنید (هر میکروتیوب برای یک واکنش)
۶. استفاده فوری یا انجماد: سلولهای مستعد را بلافاصله برای ترانسفورماسیون استفاده کرده یا در دمای ۷۰- درجه سانتیگراد فریز کنید
روش ترانسفورماسیون با سلولهای مستعد:
۱. سلولهای مستعد را بر روی یخ ذوب کنید (در صورت انجماد)
۲. ۱-۵ میکرولیتر از DNA (پلاسمید یا محصول PCR) را به میکروتیوب حاوی سلولها اضافه کنید
۳. به مدت ۳۰ دقیقه بر روی یخ قرار دهید
۴. شوک حرارتی: میکروتیوب را به مدت ۴۵-۶۰ ثانیه در حمام آب ۴۲ درجه سانتیگراد قرار دهید
۵. به مدت ۲ دقیقه بر روی یخ قرار دهید
۶. ۵۰۰-۱۰۰۰ میکرولیتر محیط LB (بدون آنتیبیوتیک) اضافه کرده و به مدت ۱ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد شیک کنید
۷. روی محیط کشت انتخابی (حاوی آنتیبیوتیک مناسب) کشت داده و overnight در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه کنید
کاربردهای تحقیقاتی:
– کلونینگ ژن (Gene Cloning) و ایجاد کتابخانههای ژنی
– ترانسفورماسیون پلاسمیدها برای بیان پروتئین نوترکیب
– آمادهسازی سلولهای مستعد برای روشهای مهندسی ژنتیک
– استفاده در روشهای PCR و ترانسفورماسیون محصولات PCR
– کاربرد در تحقیقات بیولوژی مولکولی و ژنتیک میکروبی
– مناسب برای محققان در حوزه زیستشناسی مولکولی و بیوتکنولوژی
نکات مهم و توصیهها:
– تمام مراحل را در شرایط استریل و نزدیک شعله یا هود لامینار انجام دهید
– از یخ خرد شده یا یخ مرطوب برای سرد کردن سلولها استفاده کنید
– از شوک حرارتی دقیق (۴۲ درجه سانتیگراد) برای افزایش کارایی ترانسفورماسیون اطمینان حاصل کنید
– سلولهای مستعد را بیش از یک بار فریز و ذوب نکنید
– برای سویههای مختلف، شرایط کشت و ترانسفورماسیون ممکن است متفاوت باشد
– از محیط کشت LB حاوی آنتیبیوتیک مناسب برای انتخاب کلنیهای ترانسفورم شده استفاده کنید
اطلاعات ایمنی:
– فقط برای استفاده در تحقیقات in vitro
– حاوی مواد شیمیایی با درجه خلوص بالا و عاری از DNase/RNase
– هنگام کار با محصول از دستکش و لباس آزمایشگاهی استفاده کنید
– سلولهای باکتریایی را طبق مقررات محلی دفع کنید
کلمات کلیدی مرتبط:
کیت آمادهسازی سلول مستعد، Competent Cell Preparation Kit، ترانسفورماسیون باکتریایی، کلونینگ ژن، مهندسی ژنتیک، ترانسفورماسیون شیمیایی، E. coli Competent Cells، کلرید کلسیم، پلاسمید، ۵ واکنش، کلونینگ مولکولی
MAECENAS IACULIS
Vestibulum curae torquent diam diam commodo parturient penatibus nunc dui adipiscing convallis bulum parturient suspendisse parturient a.Parturient in parturient scelerisque nibh lectus quam a natoque adipiscing a vestibulum hendrerit et pharetra fames nunc natoque dui.
ADIPISCING CONVALLIS BULUM
- Vestibulum penatibus nunc dui adipiscing convallis bulum parturient suspendisse.
- Abitur parturient praesent lectus quam a natoque adipiscing a vestibulum hendre.
- Diam parturient dictumst parturient scelerisque nibh lectus.
Scelerisque adipiscing bibendum sem vestibulum et in a a a purus lectus faucibus lobortis tincidunt purus lectus nisl class eros.Condimentum a et ullamcorper dictumst mus et tristique elementum nam inceptos hac parturient scelerisque vestibulum amet elit ut volutpat.
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.