MTT Assay Kit (۱۰۰ واکنش) – سنجش زنده‌مانی و تکثیر سلولی

معرفی کیت MTT Assay
کیت MTT Assay یکی از پرکاربردترین و استانداردترین روش‌های سنجش زنده‌مانی سلولی (Cell Viability)، تکثیر سلولی (Cell Proliferation)، و سمیت سلولی (Cytotoxicity) است. این روش بر پایه احیای نمک تترازولیوم MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) توسط آنزیم‌های دهیدروژناز میتوکندری سلول‌های زنده انجام می‌شود. محصول حاصل (فرمازان) یک ترکیب ارغوانی رنگ است که پس از حل شدن در DMSO یا ایزوپروپانول، میزان جذب نوری آن با اسپکتروفتومتر در طول موج ۵۷۰-۵۹۰ نانومتر اندازه‌گیری می‌شود. این کیت برای ۱۰۰ واکنش (در پلیت ۹۶ خانه‌ای) طراحی شده و شامل تمامی معرف‌های لازم برای انجام آزمایش می‌باشد.

ویژگی‌های کلیدی محصول:
– تعداد واکنش: ۱۰۰ واکنش (مناسب برای پلیت ۹۶ خانه‌ای)
– روش: رنگ‌سنجی (Colorimetric) بر پایه MTT
– زمان آزمایش: معمولاً ۳-۴ ساعت
– حساسیت: تشخیص سلول‌های زنده با دقت بالا
– محدوده تشخیص: معمولاً ۵۰۰ تا ۵۰,۰۰۰ سلول در هر چاهک
– طول موج خوانش: ۵۷۰-۵۹۰ نانومتر (با طول موج مرجع ۶۳۰-۶۹۰ نانومتر)
– محتویات کیت: محلول MTT، محلول حلال (Solubilization Buffer)، و بافرهای لازم
– دمای نگهداری: ۴ درجه سانتی‌گراد (دور از نور) برای نگهداری کوتاه‌مدت و ۲۰- درجه سانتی‌گراد برای نگهداری طولانی‌مدت

کاربردهای تحقیقاتی:
– سنجش زنده‌مانی سلولی (Cell Viability) پس از تیمار با داروها، ترکیبات شیمیایی، یا عوامل فیزیکی
– ارزیابی سمیت سلولی داروها، نانومواد، و ترکیبات زیست‌فعال (Cytotoxicity assays)
– مطالعه تکثیر سلولی در پاسخ به فاکتورهای رشد، سیتوکین‌ها، یا ترکیبات محرک
– غربالگری ترکیبات ضدسرطان و ارزیابی IC50
– بررسی اثرات محافظتی و سمی ترکیبات طبیعی و سنتزی
– کاربرد در پژوهش‌های سرطان، ایمنی‌شناسی، و علوم دارویی
– سنجش فعالیت متابولیک سلول‌ها به عنوان شاخص سلامت سلولی

روش کار با کیت (دستورالعمل کلی):
۱. کشت سلول‌ها: سلول‌ها را در پلیت ۹۶ خانه‌ای در محیط کشت مناسب بکارید و به مدت ۲۴-۴۸ ساعت انکوبه کنید
۲. تیمار: سلول‌ها را با غلظت‌های مختلف ترکیبات مورد نظر تیمار کرده و در زمان مناسب انکوبه کنید
۳. افزودن MTT: به هر چاهک، مقدار مشخصی از محلول MTT (معمولاً ۱۰ میکرولیتر) اضافه کنید
۴. انکوباسیون: پلیت را به مدت ۲-۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد در انکوباتور قرار دهید تا کریستال‌های فرمازان تشکیل شوند
۵. حل کردن کریستال‌ها: به هر چاهک، مقدار مشخصی از محلول حلال (معمولاً ۱۰۰ میکرولیتر DMSO یا ایزوپروپانول) اضافه کنید و به مدت ۱۰-۱۵ دقیقه در دمای اتاق یا با شیکر به آرامی مخلوط کنید
۶. اندازه‌گیری جذب: جذب نوری هر چاهک را در طول موج ۵۷۰ نانومتر با دستگاه میکروپلیت ریدر اندازه‌گیری کنید
۷. تحلیل داده‌ها: از داده‌های جذب برای محاسبه درصد زنده‌مانی سلولی نسبت به کنترل استفاده کنید

نکات مهم و توصیه‌ها:
– کیت را از نور مستقیم محافظت کنید (MTT و فرمازان به نور حساس هستند)
– تمام مراحل را در شرایط استریل و در هود لامینار انجام دهید
– از پلیت‌های ۹۶ خانه‌ای با کف صاف استفاده کنید
– در صورت کدورت یا رسوب در محلول‌ها، قبل از استفاده آن‌ها را به خوبی مخلوط کنید
– زمان انکوباسیون با MTT با توجه به نوع سلول تنظیم شود (معمولاً ۲-۴ ساعت)
– برای جلوگیری از ایجاد حباب، از ورتکس شدید خودداری کنید
– بسته به نوع سلول، تعداد سلول اولیه و زمان انکوباسیون تنظیم شود
– منحنی استاندارد با تعداد سلول‌های مشخص تهیه کنید

اطلاعات ایمنی:
– MTT یک ماده سمی است؛ از تماس مستقیم با پوست و چشم خودداری کنید
– از استنشاق پودر یا محلول MTT خودداری کنید
– هنگام کار با محصول از دستکش، عینک ایمنی و لباس آزمایشگاهی استفاده کنید
– DMSO به پوست نفوذپذیر است؛ با احتیاط کار کنید
– تمام ضایعات را طبق مقررات محلی دفع کنید

کلمات کلیدی مرتبط:
کیت MTT Assay، سنجش MTT، سنجش زنده‌مانی سلولی، تست سمیت سلولی، تکثیر سلولی، IC50، فرمازان، کیت ۱۰۰ واکنش، سلول‌های سرطانی، غربالگری دارو، MTT تترازولیوم