Trypsin-EDTA (۱۰۰ میلی‌لیتر) – برای جداسازی سلول‌ها در کشت سلولی

معرفی Trypsin-EDTA
محلول Trypsin-EDTA یکی از ضروری‌ترین و پرکاربردترین معرف‌ها در کشت سلولی است که برای جداسازی (Detachment) سلول‌های چسبنده (Adherent cells) از سطح فلاسک‌ها و پلیت‌های کشت استفاده می‌شود. تریپسین یک آنزیم پروتئاز است که با هضم پروتئین‌های چسبندگی سلولی (مانند فیبرونکتین و لامینین) و اتصالات سلول-سلول، باعث آزادسازی سلول‌ها از سطح کشت می‌گردد. EDTA (اتیلن‌دی‌آمین‌تترااستیک اسید) به عنوان یک عامل کلاته‌کننده یون‌های کلسیم و منیزیم، به تریپسین کمک کرده و فعالیت آنزیمی را افزایش می‌دهد. این محصول با حجم ۱۰۰ میلی‌لیتر به صورت محلول استریل و آماده مصرف ارائه می‌شود.

ویژگی‌های کلیدی محصول:
– حجم: ۱۰۰ میلی‌لیتر
– فرم: محلول مایع استریل (Sterile Liquid)
– ترکیبات اصلی: تریپسین (آنزیم پروتئاز) و EDTA (عامل کلاته‌کننده)
– غلظت معمول: ۰.۲۵ درصد تریپسین و ۰.۵ میلی‌مولار EDTA (با توجه به نوع محصول)
– فاقد: فنل رد (Phenol Red) در برخی مدل‌ها (اختیاری)
– عاری از: میکروارگانیسم‌ها، مایکوپلاسما، و اندوتوکسین
– pH: حدود ۷.۲-۷.۴ (تنظیم شده با بیکربنات)
– دمای نگهداری: ۲۰- درجه سانتی‌گراد (برای نگهداری طولانی‌مدت) یا ۴ درجه سانتی‌گراد (برای استفاده کوتاه‌مدت)
– ماندگاری: معمولاً ۱۲ ماه از تاریخ تولید

کاربردهای تحقیقاتی:
– جداسازی سلول‌های چسبنده (Adherent cells) از فلاسک‌ها و پلیت‌های کشت سلولی
– پاساژ (Subculture) سلول‌ها برای تکثیر و نگهداری
– آماده‌سازی سلول‌ها برای شمارش، کشت مجدد، یا آزمایشات پایین‌دستی
– جداسازی سلول‌های بنیادی و سلول‌های سرطانی در کشت سلولی
– کاربرد در روش‌های آنزیمی هضم بافت برای جداسازی سلول‌های اولیه

روش استفاده و مقدار مصرف:
۱. محیط کشت روی سلول‌ها را با دقت خارج کنید
۲. برای شستشو، PBS یا محیط کشت بدون سرم به فلاسک اضافه کرده و خارج کنید (برای حذف آثار سرم که تریپسین را غیرفعال می‌کند)
۳. به ازای هر فلاسک T25 حدود ۱-۲ میلی‌لیتر و برای فلاسک T75 حدود ۳-۵ میلی‌لیتر Trypsin-EDTA اضافه کنید
۴. سلول‌ها را به مدت ۲-۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید
۵. پس از جدا شدن سلول‌ها، با ضربه‌های ملایم به فلاسک، سلول‌ها را کاملاً جدا کنید
۶. برای غیرفعال‌سازی تریپسین، به همان حجم یا دو برابر حجم Trypsin-EDTA، محیط کشت حاوی سرم اضافه کنید (سرم حاوی مهارکننده‌های تریپسین است)
۷. سلول‌ها را سانتریفیوژ کرده و پس از شستشو، مجدداً در محیط کشت تازه سوسپانسیون کنید

نکات مهم و توصیه‌ها:
– تریپسین در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد بهترین عملکرد را دارد
– زمان انکوباسیون با تریپسین نباید طولانی شود، زیرا ممکن است به سلول‌ها آسیب برساند
– پس از خارج کردن از یخچال، محصول را به دمای اتاق یا ۳۷ درجه سانتی‌گراد برسانید
– از تکرار انجماد و ذوب خودداری کنید (آلیکوت‌های کوچک تهیه نمایید)
– برای سلول‌های حساس، از غلظت‌های پایین‌تر (۰.۰۵٪) یا جایگزین‌های غیرآنزیمی (مانند Versene) استفاده کنید
– در صورت عدم مشاهده جداسازی سلول‌ها، مقدار Trypsin-EDTA را افزایش دهید یا زمان انکوباسیون را طولانی‌تر کنید

اطلاعات ایمنی:
– فقط برای استفاده در تحقیقات in vitro
– هنگام کار با محصول از دستکش و عینک ایمنی استفاده کنید
– از استنشاق و تماس مستقیم با پوست و چشم خودداری کنید
– در صورت تماس با پوست یا چشم، با آب فراوان شستشو دهید
– محلول‌های استفاده شده را طبق مقررات محلی دفع کنید

کلمات کلیدی مرتبط:
Trypsin-EDTA، تریپسین، جداسازی سلول، کشت سلولی، پاساژ سلول، آنزیم پروتئاز، سلول چسبنده، کشت سلول، محلول استریل