Total Anti-oxidant Capacity (TAC) Assay Kit based on DPPH

کیت اندازه‌گیری ظرفیت خنثی‌سازی رادیکال آزاد بر اساس روش DPPH محصول شرکت کارمانیا پارس ژن، یک کیت تخصصی، دقیق و استاندارد برای سنجش فعالیت آنتی‌اکسیدانی و ظرفیت خنثی‌سازی رادیکال‌های آزاد در انواع نمونه‌های گیاهی، جانوری (سرم، پلاسما، بافت)، غذایی و دارویی است. روش DPPH یکی از پرکاربردترین، سریع‌ترین و معتبرترین روش‌ها برای تعیین ظرفیت آنتی‌اکسیدانی در سراسر جهان محسوب می‌شود. اساس این روش بر پایه کاهش رادیکال پایدار DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) توسط آنتی‌اکسیدان‌های موجود در نمونه است. رادیکال DPPH دارای رنگ بنفش مشخص با جذب در طول موج ۵۱۷ نانومتر است و هنگامی که توسط آنتی‌اکسیدان‌ها احیا می‌شود، رنگ آن به زرد/بی‌رنگ تغییر می‌کند. هر چه فعالیت آنتی‌اکسیدانی نمونه بیشتر باشد، کاهش رنگ بیشتری مشاهده می‌شود. این کیت برای ارزیابی استرس اکسیداتیو، کنترل کیفیت مواد غذایی، عصاره‌های گیاهی، ترکیبات دارویی و مطالعات آنتی‌اکسیدانی کاربرد گسترده‌ای دارد.
مزایا و کاربردهای کلیدی کیت:
– روش استاندارد و معتبر جهانی (DPPH): مبتنی بر مهار رادیکال DPPH با خوانش در طول موج ۵۱۷ نانومتر.
– نمونه‌های قابل استفاده متنوع: این کیت برای اندازه‌گیری ظرفیت آنتی‌اکسیدانی در سرم، پلاسما، ادرار، بافت هموژنزه، لیزات سلولی، عصاره‌های گیاهی، مواد غذایی و ترکیبات دارویی بهینه‌سازی شده است.
– حساسیت و دقت بالا: با استفاده از استانداردهای غلظت‌های مختلف (۳.۱۲ تا ۲۵ میکرومول)، امکان اندازه‌گیری دقیق در محدوده وسیعی فراهم شده است.
– قابلیت محاسبه IC50: امکان تعیین غلظت مهارکنندگی ۵۰ درصد (IC50) برای ترکیبات دارویی و عصاره‌ها.
– طراحی ایرانی، کیفیت جهانی: محصولی از شرکت دانش‌بنیان کارمانیا پارس ژن با استانداردهای بین‌المللی.
کاربردهای بالینی و تحقیقاتی:
– ارزیابی ظرفیت آنتی‌اکسیدانی در بیماری‌های مزمن: دیابت، بیماری‌های قلبی-عروقی، بیماری‌های کبدی.
– کنترل کیفیت مواد غذایی و نوشیدنی‌ها: اندازه‌گیری آنتی‌اکسیدان‌های موجود در عصاره‌های گیاهی، میوه‌ها، چای، قهوه و محصولات غذایی.
– تحقیقات دارویی و گیاهی: ارزیابی فعالیت آنتی‌اکسیدانی ترکیبات طبیعی و سنتزی و محاسبه IC50.
– مطالعات پیری و بیماری‌های نورودژنراتیو: نقش آنتی‌اکسیدان‌ها در پیشگیری از آسیب‌های اکسیداتیو.
– تحقیقات آنتی‌اکسیدانی: ارزیابی اثربخشی ترکیبات آنتی‌اکسیدان.
نمونه‌های قابل استفاده و نحوه آماده‌سازی:
سرم، پلاسما و ادرار: این نمونه‌ها نیازی به رقیق‌سازی ندارند، اما در صورتی که میزان پروتئین در نمونه زیاد باشد، نمونه باید رقیق شود (معمولاً ۱ به ۲).
بافت هموژنزه: ۲۰ میلی‌گرم از بافت را در ۵۰۰ میکرولیتر بافر رقیق کننده A (که از قبل در یخچال سرد شده است) کاملاً هموژن کنید (این عمل در دمای سرد انجام شود). سپس با دور ۱۰۰۰۰ RPM به مدت ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ کرده و در نهایت مایع رویی را به میزان یک پنجم با بافر رقیق کننده A رقیق کرده (مثلاً ۲۰ میکرولیتر نمونه با ۸۰ میکرولیتر بافر رقیق کننده A) و سپس در تست استفاده کنید. در صورتی که کاهش رنگ محسوس نباشد، میزان رقت را کاهش دهید (مثلاً ۱ به ۲). بنابراین قبل از انجام تست، حتماً یک نمونه را بررسی کرده و رقت مناسب را به دست آورید.
> نکات مهم:
> – در صورتی که نمونه شما فاقد پروتئین باشد، نیازی به افزودن پروتئیناز K و انکوباسیون ۲ ساعته در دمای ۵۵ درجه نیست و مستقیماً بعد از اضافه کردن نمونه و بافر رقیق کننده A، وارد مرحله بعد شوید.
> – از سوپرناتانت کشت سلول به دلیل وجود معرف‌های رنگی حساس به pH استفاده نکنید.
> – با توجه به اینکه آنتی‌اکسیدان‌ها باعث بی‌رنگ شدن سوبسترا می‌شوند، هر چه میزان آنها بیشتر باشد، میزان رنگ کمتر می‌شود.
لیزات سلولی: سلول‌ها را ابتدا از محیط جمع‌آوری کرده و با PBS شستشو دهید. سپس در بافر ریپا مخصوص تست‌های استرس اکسیداتیو (قابل تهیه از کارمانیا پارس ژن) با دستگاه سونیکاتور کاملاً لیز کنید. لیزات سلول را سانتریفیوژ کرده و از سوپرناتانت برای تست استفاده کنید. در صورت عدم دسترسی به سونیکاتور، نمونه سلول غوطه‌ور شده در بافر ریپا را به تعداد ۱۰ مرتبه فریز و ذوب کرده و در هر بار به شدت مخلوط کنید.
محدوده استانداردها:
استانداردهای کیت در غلظت‌های ۳.۱۲، ۶.۲۵، ۱۲.۵ و ۲۵ میکرومول تهیه می‌شوند و امکان رسم منحنی استاندارد دقیق را فراهم می‌آورند.
فرمول محاسبه درصد مهار و IC50:
درصد مهار = (جذب نمونه ÷ جذب بلانک) × ۱۰۰
– در مواردی که دارو و یا ترکیب خاصی را مورد بررسی قرار می‌دهید، برای محاسبه IC50 باید رقتی که جذب آن در این فرمول پنجاه درصد نشان دهد را به عنوان IC50 انتخاب کنید
اطلاعات تماس:
تولیدکننده: کارمانیا پارس ژن

آدرس کارخانه: رفسنجان، ۲۰ کیلومتر جاده رفسنجان به کرمان، منطقه ویژه اقتصادی، ناحیه غذا و دارو
تلفن: ۰۹۱۳۲۹۲۶۱۱۳
ایمیل: Karmaniaparsgene@gmail.com
کلمات کلیدی: کیت اندازه‌گیری DPPH، ظرفیت خنثی‌سازی رادیکال آزاد، آنتی‌اکسیدان، روش DPPH، IC50، کنترل کیفیت مواد غذایی، عصاره‌های گیاهی، کیت تشخیص آنتی‌اکسیدانی، استرس اکسیداتیو، تجهیزات آزمایشگاهی، کیت ایرانی DPPH، DPPH Free Radical Scavenging Assay Kit