کیت تشخیص فعالیت اسید فسفاتاز (Acid Phosphatase Assay Kit)

این کیت یک روش رنگ‌سنجی سریع و حساس برای تشخیص فعالیت آنزیم اسید فسفاتاز در نمونه‌های سرم، بافت و لیزات سلولی فراهم می‌کند. اساس کار این کیت، استفاده از بافر رنگ‌زا (سوبسترای pNPP) است که در حضور آنزیم اسید فسفاتاز هیدرولیز شده و محصول زرد رنگی به نام پارا-نیتروفنول (pNP) تولید می‌کند. شدت رنگ ایجاد شده با میزان فعالیت آنزیم نمونه رابطه مستقیم دارد. این کیت امکان تعیین میزان فعالیت آنزیم را در مدت ۱۵ دقیقه فراهم می‌کند.
محتویات کیت:1. بافر نمونه (Sample Dilution Buffer) (KPG-APSB)2. بافر رنگ‌زا (Dying Buffer) (KPG-APDB)3. بافر متوقف کننده (Stopping Buffer) (KPG-APStB)4. پلیت الایزا
آماده سازی معرف‌ها:– بافر نمونه به صورت آماده به کار است و نیاز به آماده سازی ندارد.– بافر رنگ‌زا نیاز به آماده سازی دارد و بایستی به میزان ۵ میلی لیتر آب مقطر به آن اضافه و به خوبی مخلوط شود. بعد از آماده سازی این محلول به مدت ۱ ماه در دمای یخچال پایداری دارد.– بافر متوقف کننده آماده به کار است و نیاز به آماده سازی ندارد.
مواد مورد نیاز (در کیت موجود نیست):– پیپت‌های دقیق (۵۰ و ۱۰۰ میکرولیتر)– انکوباتور ۳۷ درجه سانتی‌گراد– الایزا ریدر با طول موج ۴۰۵ نانومتر
آماده سازی نمونه:– نمونه سرم: نمونه سرم را مستقیماً در تست استفاده کنید.– نمونه بافت: ۵۰ میلی‌گرم بافت را در ۵۰۰ میکرولیتر بافر نمونه کاملاً هموژن کرده سپس در دور RPM ۱۰,۰۰۰ به مدت ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ کنید و از مایع رویی که کاملاً شفاف است استفاده کنید.– نمونه کشت سلولی: ۱ میلیون سلول را در ۳۰۰ میکرولیتر بافر نمونه سوسپانسیون کرده و در دستگاه سونیکاتور (۳ برنامه پنج دقیقه‌ای، قدرت ۷۵، پالس ۴ ثانیه و استراحت ۲ ثانیه بر روی یخ) پاره کنید. در صورت عدم دسترسی به سونیکاتور، نمونه را ۱۰ مرتبه منجمد و ذوب کنید.نکات مهم:– کیت را در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کنید و ۳۰ دقیقه قبل از آزمایش به دمای محیط برسانید.– در حالت طبیعی فعالیت آنزیم اسید فسفاتاز در نمونه سرم بسیار کم است و فقط در موارد پاتولوژیک فعالیت قابل توجهی در سرم دارد.– برای نمونه‌های بافت، حتماً با تعیین رقت، رقت مناسب به دست آورید به گونه‌ای که خوانش در محدوده OD 1-1.5 قرار بگیرد.– از جایگزینی مواد کیت با سایر مواد خودداری کنید